芍药肌动蛋白基因的克隆及表达分析

目的 克隆芍药肌动蛋白(Actin)基因并应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况.方法 根据近缘物种Actin基因的保守序列设计一对PCR扩增引物,以“桃花飞雪”芍药根部总RNA反转录而成的cDNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出芍药Actin cDNA全长并克隆至pMD 18-T载体上,阳性克隆经菌落PCR、质粒PCR及酶切鉴定后进行测序.基于测序结果设计特异性PCR引物,应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药根、茎、花、叶不同组织中的表达情况.结果 测序结果表明芍药Actin基因全长l 134 bp序列,共编码377个氨基酸,GenBank登录号为JX310002;序列分析表明芍药Actin蛋白中存在3种肌动蛋白特征信号序列,与其他植物肌动蛋白氨基酸同源性达99％;基于同源模建预测的3D结构中含有4个结构域;生物信息学软件预测芍药肌动蛋白的相对分子质量为4.17×104,等电点(pI)为5.31,是一个定位于胞液、不含跨膜域、不含信号肽分子的亲水性、稳定蛋白;半定量RT-PCR技术分析表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花组织中的表达量保持恒定.结论 首次从芍药中克隆了Actin基因,半定量RT-PCR表达分析结果表明Actin基因适合作为芍药功能基因表达分析的内标基因,为有效利用该基因奠定了基础.     

白芍饮片标准汤剂质量标准研究

目的:制备白芍饮片标准汤剂,并进行质量标准研究。方法:以水为溶剂,以标准化工艺制备标准汤剂,采用UPLCDAD法测定芍药苷含量,并进行转移率、出膏率计算及指纹图谱研究。结果:10批次白芍样品制成的标准汤剂中芍药苷含量为1.69~2.60 mg/m L,转移率为60.47%~85.16%,平均转移率为71.62%,标准偏差为8.74%。出膏率范围为19.00%~26.50%,平均出膏率为21.89%,标准偏差为2.51%。指纹图谱共有峰11个,确认5个,分别是:氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷。结论:本方法处理样品简单,重复性好,可用于白芍标准汤剂的制备及质量标准研究。     

Pharmacokinetics and disposition of monoterpene glycosides derived from Paeonia lactiflora roots (Chishao) after intravenous dosing of antiseptic XueBiJing injection in human subjects and rats

Aim:

Monoterpene glycosides derived from Paeonia lactiflora roots (Chishao) are believed to be pharmacologically important for the antiseptic herbal injection XueBiJing. This study was designed to characterize the pharmacokinetics and disposition of monoterpene glycosides.

Methods:

Systemic exposure to Chishao monoterpene glycosides was assessed in human subjects receiving an intravenous infusion and multiple infusions of XueBiJing injection, followed by assessment of the pharmacokinetics of the major circulating compounds. Supportive rat studies were also performed. Membrane permeability and plasma-protein binding were assessed in vitro.

Results:

A total of 18 monoterpene glycosides were detected in XueBiJing injection (content levels, 0.001–2.47 mmol/L), and paeoniflorin accounted for 85.5% of the total dose of monoterpene glycosides detected. In human subjects, unchanged paeoniflorin exhibited considerable levels of systemic exposure with elimination half-lives of 1.2–1.3 h; no significant metabolite was detected. Oxypaeoniflorin and albiflorin exhibited low exposure levels, and the remaining minor monoterpene glycosides were negligible or undetected. Glomerular-filtration-based renal excretion was the major elimination pathway of paeoniflorin, which was poorly bound to plasma protein. In rats, the systemic exposure level of paeoniflorin increased proportionally as the dose was increased. Rat lung, heart, and liver exposure levels of paeoniflorin were lower than the plasma level, with the exception of the kidney level, which was 4.3-fold greater than the plasma level; brain penetration was limited by the poor membrane permeability.

Conclusion:

Due to its significant systemic exposure and appropriate pharmacokinetic profile, as well as previously reported antiseptic properties, paeoniflorin is a promising XueBiJing constituent of therapeutic importance.     

赤芍乙酸乙酯部位化学成分的研究

通过MCI树脂、Sephadex LH-20和反相HPLC等多种色谱分离方法相结合,从赤芍乙醇提取中的乙酸乙酯部位中分离得到个15化合物,经MS和NMR,CD等波谱技术分别鉴定(+)-(7R,8R)-1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,2-异丙叉基丙二醇(1),(-)-(7R,8S)-1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,2-异丙叉基丙二醇(2),senecioyllomatin(3),O-angeloyllomatin(4),(+)-cis-3'-senecioyloxy-4'-angeloyloxy-3',4'-dihydroseselin(5),二氢欧山芹素(6),2,5-二羟基苯乙酸苄酯(7),3,6-二甲基-5-羟基苯并呋喃(8),(S)-楝叶吴萸素A(9),2,3-二羟基-4-甲氧基苯乙酮(10),2,5-二羟基-4-甲氧基苯乙酮(11),2,5-二羟基-4-甲基苯乙酮(12),4-羟基苯甲酸乙酯(13),香草酸(14),4-羟基-3-甲氧基苯甲醛(15)。化合物1,2为新化合物。化合物3~9均为首次从芍药属植物中分离得到。     

牡丹皮、赤芍与白芍对急性血瘀模型大鼠活血功效的比较研究

目的观察牡丹皮、赤芍与白芍对急性血瘀模型大鼠的影响,揭示三者在功效方面的异同,并探讨牡丹皮、赤芍与白芍活血功效的机制。方法大鼠sc盐酸肾上腺素结合冰水浸泡制作急性血瘀模型,以丹参注射液为阳性对照,观察牡丹皮、赤芍与白芍对血液流变学、凝血功能指标、血小板系统、血清中血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α)的影响。结果与模型组相比,牡丹皮能够延长急性血瘀模型大鼠的凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)(P0.05),显著抑制血小板黏附(P0.01),且上调血小板内皮型一氧化氮合酶(e NOS)与Ser1177位磷酸化的e NOS(p-e NOS)蛋白表达水平(P0.01、0.001),减少血清中TXB2(P0.05)及增加6-keto-PGF1α的量(P0.01);赤芍能够显著改善不同切变率下血瘀模型大鼠的全血黏度,延长部分活化凝血活酶时间(APTT)、PT、TT(P0.05、0.01),降低血小板黏附率(P0.05),减少血清中TXB2的量(P0.01)、增加6-keto-PGF1α的量(P0.01),上调血小板e NOS、p-e NOS蛋白表达水平(P0.05);白芍则对血瘀模型大鼠的全血黏度的影响并不显著,但能够显著延长APTT、TT(P0.05),降低血小板黏附率(P0.05),增加血清中6-keto-PGF1α的量(P0.05),同时显著增加血小板e NOS、p-e NOS蛋白表达水平(P0.05)。结论牡丹皮、赤芍和白芍均具有不同程度改善血液流变性、凝血系统、抑制血小板黏附率、增加血小板e NOS、p-e NOS蛋白表达水平,但牡丹皮、赤芍较白芍活血化瘀作用强。     

基于多指标成分评价川西高原野生川赤芍的质量

目的 研究川西高原上野生川赤芍Paeonia veitchii入药部位（根）和非入药部位（地上部分）中没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸和丹皮酚7种化学成分的含量,并综合评价其品质。方法 以上述7种成分为对照品,采用高效液相色谱（HPLC）法,Agilent HC-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,柱温30℃,体积流量1 mL/min,进样量10 μL,检测波长230 nm,乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱;采用2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件构建指纹图谱;采用聚类热图分析、相似度分析、主成分分析（principal component analysis,PCA）、偏最小二乘回归分析（partial least squares discrimination analysis,PLS-DA）等方法对各产地川赤芍进行评价。结果 野生川赤芍地上部分和根中均含有7种化学成分,仅有3批次地上部分样品中芍药苷含量不符合《中国药典》2020年版的要求。建立了野生川赤芍根和地上部分的HPLC指纹图谱,二者均标定了19个相同的共有峰,并指认出其中的7个（没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、丹皮酚）。不同产地川赤芍的化学成分种类和含量存在一定差异且存在明显的区域一致性特征,但芍药苷的差异相对较小。康定市老榆林、雅江县相格宗、阿坝县查理加油站和若尔盖县巴西乡的川赤芍药材质量相对较好。结论 建立的HPLC方法可用于分析川赤芍中的主要化合物,川西高原野生川赤芍药材质量符合《中国药典》要求,川赤芍根和地上部分中化学成分的种类和含量相近,地上部分具有开发利用的潜力。     

高效液相色谱法测定雄芍颗粒中芍药苷的含量

目的:采用高效液相色谱法测定雄芍颗粒中芍药苷的含量。方法:采用HPLC法,色谱柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86);流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm。结果:芍药苷在0.107 8~2.156 0μg线性关系良好(r=0.999 7);平均回收率为99.26%,RSD为2.06%(n=5)。结论:该方法简便、准确、可靠、重现性好,可用于雄芍颗粒的质量控制。     

白芍的化学成分研究

从白芍 (PaeonialactifloraPall.)的干燥根中分离得到 5个化合物 ,经理化常数和光谱分析分别鉴定为芍药苷 (1)、苯甲酰芍药苷 (2 )、没食子酰芍药苷 (3)、1,2 ,3 ,4,6 五没食子酰基葡萄糖(4 )和胡萝卜苷 (5 )     

用扫描仪评价不同产地赤芍提取物对红细胞聚集的抑制作用

为了解不同产地赤芍乙醇提取物对于红细胞聚集的影响。本文采用扫描仪对此进行了评价。用葡聚糖500诱导大鼠红细胞在体外悬浮液中的聚集,观察终浓度138mg/ml的赤芍提取液对此的影响。实验表明,细胞悬浮液扫描图象的灰度与红细胞悬浮液的细胞聚集程度有显著相关。实验结果表明,六个产地中的四个赤艾提取物对于红细胞聚集有明显抑制,其中内蒙古多伦出产的赤芍效果最明显（P＜0．01）。结果可说明药材的道地性。     

白芍总苷联合硒酵母对Graves病患者促甲状腺激素受体抗体水平及突眼度的影响

目的 观察白芍总苷联合硒酵母对Graves病患者促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平及突眼度的影响.方法 选取本院内分泌科门诊2019年10月至2020年2月收治的90例Graves患者为研究对象,按随机数字表法将其分为对照组、治疗组1、治疗组2,各30例.三组均予以甲巯咪唑治疗,治疗组1在此基础上加用硒酵母治疗,治疗...